目的通过研究2022年7月至2023年5月青海省5家医院分离的碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌（CRE）的分布、基因型及耐药性，为临床CRE感染的治疗、院内感染防控，以及抗菌药物制订和评价提供数据支持。方法采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪进行细菌鉴定，采用VITEK Ⅱ compact进行细菌药敏试验，采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行产酶表型鉴定，采用聚合酶链反应检测碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM和blaOXA-48)。对分离出的优势菌株进行多位点序列分型（MLST）和同源性分析。结果共分离出59株CRE，其中50株分离自临床标本，9株分离自患者所处的环境；59株CRE中阴沟肠杆菌23株，肺炎克雷伯菌22株，大肠埃希菌7株，产酸克雷伯菌5株，弗氏柠檬酸杆菌和布氏柠檬酸杆菌各1株。CRE主要分离于重症监护病房、烧伤科、肝胆科。标本来源主要为伤口分泌物、痰液、血液。59株CRE对酶抑制剂复合制剂、头孢菌素类、氨曲南及碳青霉烯类等抗菌药物均具有较高的耐药率（87.5%~100.0%），对阿米卡星和替加环素的耐药率相对较低，分别为30.4%和15.5%。最常见的碳青霉烯酶基因型是blaNDM（59.32%，35/59），其次是blaKPC(32.20%，19/59)，肺炎克雷伯菌中blaKPC-2检出率最高(72.73%，16/22)，阴沟肠杆菌中blaNDM-1检出率最高(69.57%，16/23)。MLST结果显示，肺炎克雷伯菌ST分型主要为ST11型（68.18%，15/22），阴沟肠杆菌ST分型主要为ST97型 (26.09%，6/23)，9株从患者所处环境中分离出的CRE与临床菌株的ST型一致。结论青海省5家医院分离的CRE耐药率普遍较高，主要以阴沟肠杆菌和肺炎克雷伯菌为主，碳青霉烯酶基因以blaNDM和blaKPC为主，耐药问题严重，临床应加强CRE的筛查及控制，预防其在院内传播。