目的探讨开放性骨折患者清创前、后创面细菌计数和核因子-κB（NF-κB）/c-Jun N-末端激酶（JNK）/磷酸酰肌醇3-激酶（PI3K）炎症信号通路相关因子对骨感染的诊断价值。方法选取2020年1月至2023年8月达州市中心医院收治的开放性骨折患者257例，根据是否发生骨感染分为感染组（31例）和无感染组（226例）。比较两组基线资料及清创前、后创面细菌计数及NF-κB信使RNA（mRNA）、JNK mRNA、PI3K mRNA水平；采用Pearson相关分析开放性骨折患者NF-κB mRNA、JNK mRNA、PI3K mRNA水平与创面细菌计数的相关性；绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析创面细菌计数、NF-κB mRNA、JNK mRNA、PI3K mRNA对开放性骨折患者发生骨感染的诊断价值；采用危险度分析不同创面细菌计数、NF-κB mRNA、JNK mRNA、PI3K mRNA表达开放性骨折患者发生骨感染的情况。结果感染组和无感染组Gustilo分型、受伤至手术时间、骨折固定方式比例、合并糖尿病比例比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）；两组清创后创面细菌计数及NF-κB mRNA、JNK mRNA、PI3K mRNA水平低于清创前，差异均有统计学意义（P＜0.05）；清创后，感染组创面细菌计数及NF-κB mRNA、JNK mRNA、PI3K mRNA水平高于无感染组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。Pearson相关分析结果显示，清创前、后开放性骨折患者NF-κB mRNA、JNK mRNA、PI3K mRNA水平与创面细菌计数均呈正相关（P＜0.05）。ROC曲线结果显示，创面细菌计数、NF-κB mRNA、JNK mRNA、PI3K mRNA诊断开放性骨折患者骨感染的曲线下面积（AUC）分别为0.807、0.742、0.807、0.766，灵敏度分别为87.10%、61.29%、61.29%、67.74%，特异度分别为65.04%、88.63%、93.36%、74.41%，以上4项指标联合诊断骨感染的AUC为0.924，灵敏度为83.87%；特异度为89.10%。创面细菌计数及NF-κB mRNA、JNK mRNA、PI3K mRNA表达阳性患者骨感染的相对风险是阴性患者的9.616、7.459、10.385、4.732倍，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论创面细菌计数、NF-κB/JNK/PI3K炎症信号通路相关因子水平在开放性骨折并发骨感染患者创面组织中升高，上述指标联合检测对骨感染具有一定诊断价值，可作为临床诊断骨感染的辅助指标。