目的探究甲基转移酶14（METTL14）通过N6-甲基腺嘌呤（m6A）甲基化调控沉默信息调节因子6（SIRT6）介导线粒体自噬影响心肌细胞缺血再灌注（I/R）损伤的可能机制。方法以人心肌细胞系AC16细胞株为研究对象，构建p-METTL14（p-METTL14组）、p-METTL14/SIRT6 siRNA（p-METTL14/si-SITR6组）、si-METTL14（si-METTL14组）及其阴性对照（p-NC METTL14组、si-NC SITR6组）转染细胞，并采用定量聚合酶链反应（qPCR）检测各组细胞中METTL14、SIRT6表达水平。将稳定表达的p-METTL14组、p-METTL14/SIRT6 siRNA组及p-NC组细胞给予缺氧（37 ℃、5%CO2、92%N2、3%O2中孵育21 h）/复氧（37 ℃常氧环境中培养3 h）培养并分别命名为I/R+p-METTL14组、I/R+p-METTL14/si-SIRT6组、I/R+p-NC组，将缺氧/复氧培养的AC16细胞记为I/R组，不做任何处理的AC16细胞记为空白组。采用RNA甲基化免疫共沉淀技术（MeRIP）-qPCR检测METTL14对SITR6 m6A富集程度的影响，采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）和流式细胞仪检测各组AC16细胞的细胞增殖水平及凋亡率，采用线粒体/溶酶体免疫荧光双标记染色法观察各组细胞线粒体自噬水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组AC16细胞中自噬标志物（LC3）Ⅰ/Ⅱ、自噬相关基因1（Beclin-1）、p62、Caspase-3、B淋巴细胞瘤-2关联X蛋白（bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达水平。结果si-METTL14/anti-m6A组中的SITR6 m6A+相对富集程度为0.41±0.11，低于si-NC anti-m6A组的0.92±0.13，差异均有统计学意义（P<0.05）；与空白组比较，I/R组和I/R+p-NC组AC16细胞的细胞活力、Bcl-2、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、p62蛋白表达水平降低，细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平升高，差异均有统计学意义（P<0.05）。与I/R+p-NC组比较，I/R+p-METTL14组AC16细胞的细胞活力、Bcl-2蛋白水平、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、p62蛋白升高，细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。与I/R+p-METTL14组比较，I/R+p-METTL/si-SIRT6组的细胞活力、Bcl-2、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、p62蛋白表达水平降低，细胞凋亡率、Bax、Caspase-3蛋白表达水平升高，差异均有统计学意义（P<0.05）；免疫荧光双标记法染色结果显示，I/R组和I/R+p-NC组细胞中线粒体活性表达明显降低，溶酶体活性明显上调，I/R+p-METTL14组细胞中的线粒体活性及溶酶体活性均有一定程度上调，但线粒体活性表达较低，I/R+p-METTL14/si-SIRT6组细胞中线粒体活性降低，溶酶体活性一定程度升高。结论METTL14能够通过m6A甲基化作用稳定SIRT6的mRNA并促进心肌细胞的线粒体自噬，最终改善心肌细胞I/R损伤。