湖南中医药大学校院联合基金项目(2024XYLH224)
目的探讨花生四烯酸15-脂氧合酶(ALOX15)调控谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)介导铁死亡对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法培养不同胶质瘤细胞(A172、U87、LN229)和正常胶质细胞(HA1800),采用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测不同细胞中ALOX15 mRNA及蛋白的表达,并将ALOX15 mRNA及蛋白表达最低的细胞分为对照组(正常培养,不进行任何处理)、ALOX15组(pcDNA-ALOX15转染细胞)、ALOX15+GPX4组(pcDNA-ALOX15、pcDNA-GPX4转染细胞)。采用CCK-8实验、划痕实验、Transwell小室实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,采用DCFH-DA荧光探针检测细胞中活性氧(ROS)水平,采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测铁死亡相关蛋白[GPX4、长链酯酰辅酶A合成酶4(ACSL4)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NOX1)、环氧化酶2(COX2)]表达。结果与正常胶质细胞HA1800比较,胶质瘤细胞A172、U87、LN229中ALOX15 mRNA及蛋白表达均降低(P<0.05);与胶质瘤细胞A172比较,胶质瘤细胞U87中ALOX15 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05)。与胶质瘤细胞U87比较,胶质瘤细胞LN229中ALOX15 mRNA及蛋白表达升高(P<0.05)。其中U87细胞ALOX15 mRNA及蛋白表达最低,后续实验用U87细胞完成。与对照组比较,ALOX15组ALOX15 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),细胞增殖率、迁移率和侵袭率明显降低(P<0.05)。与对照组比较,ALOX15组细胞中ROS水平,ACSL4、NOX1、COX2 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),GPX4 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05)。与ALOX15组比较,ALOX15+GPX4组GPX4 mRNA及蛋白表达、细胞增殖率、迁移率和侵袭率明显升高(P<0.05),ROS水平,ACSL4、NOX1、COX2 mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论ALOX15过表达可抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力,可能通过抑制GPX4表达,诱导细胞铁死亡。
邹和琴 ,何娟 ,范冶 △. ALOX15调控GPX4介导铁死亡抑制胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭[J].检验医学与临床,2025,22(18):2498-2503