目的利用单细胞RNA测序(scRNA-seq)技术分析大鼠角膜内皮机械损伤后修复过程中的细胞异质性、功能转化与分化轨迹，以阐明角膜内皮细胞（CECs）在有限增殖下的体内修复机制。方法选取30只健康雄性SD大鼠作为实验对象，将其随机分为对照组（未接受手术大鼠）、D5组（手术损伤后5 d大鼠，代表炎症反应高峰期）和D10组（手术损伤后10 d大鼠，代表修复与重塑的后期阶段），每组10只。收集3组CECs进行scRNA-seq。通过聚类分析、差异表达、功能富集和拟时序分析，分析CECs亚群动态演变。结果3组CECs共鉴定出7个功能上截然不同的亚群，命名为CECs_1~CECs_7，且这7个亚群的占比情况在CECs损伤修复的不同阶段表现出剧烈的动态变化。对照组中表达增殖相关基因的CECs_5亚群仅占3.67%，D5组中CECs_5的占比上升至13.40%。拟时序分化轨迹结果显示，在对照组，细胞的分化轨迹起始于稳态的CECs_1；D5组以CECs_2、CECs_4主导的“免疫防御轴”激活；D10组以CECs_3、CECs_6主导的“ECM重塑轴”。结论CECs损伤修复中存在“免疫防御-ECM重塑”双轴协同修复及具增殖潜能的CECs。