目的探讨细胞骨架相关蛋白2样（CKAP2L）在吉西他滨耐药膀胱癌细胞中的表达变化，以及其对癌细胞生物学行为和药物敏感性的影响。方法采用浓度梯度诱导法建立吉西他滨耐药膀胱癌细胞株T24/GEM和5637/GEM，利用小干扰RNA敲低各耐药细胞CKAP2L基因表达，将T24、5637细胞分别分为：（1）T24、5637组；（2）T24/GEM、5637/GEM组;（3）NC-T24/GEM、NC-5637/GEM组;（4）si-T24/GEM、si-5637/GEM组。采用CCK-8实验检测各组细胞增殖率，采用划痕实验评估各组细胞迁移能力。通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测各组细胞CKAP2L mRNA、蛋白表达情况。转染后的T24/GEM、5637/GEM细胞进行吉西他滨敏感性实验。结果与T24组相比，T24/GEM组CKAP2L mRNA及蛋白相对表达量均升高（P<0.05）。与5637组相比，5637/GEM组CKAP2L mRNA及蛋白相对表达量均升高（P<0.05）。48 h时，si-T24/GEM组细胞增殖率低于T24组、T24/GEM组和NC-T24/GEM组（P<0.05）,si-5637/GEM组细胞增殖率低于5637组、5637/GEM组和NC-5637/GEM组（P<0.05）。si-T24/GEM 组细胞迁移率显著低于T24组、T24/GEM组、NC-T24/GEM组（P<0.001），si-5637/GEM 组细胞迁移率显著低于5637组、5637/GEM组、NC-5637/GEM组（P<0.001）。在吉西他滨≥5 μmol/L时，si-T24/GEM细胞的存活率均低于NC-T24/GEM细胞（P<0.05）；在吉西他滨≥2.5 μmol/L时，si-5637/GEM细胞的存活率均低于NC-5637/GEM细胞（P<0.05）。线性回归分析结果显示，NC-T24/GEM、si-T24/GEM、NC-5637/GEM、si-5637/GEM细胞的存活率均随着吉西他滨浓度升高而呈线性下降（P<0.05），si-T24/GEM细胞（R 2=0.91，P<0.05，b=1.71）的存活率下降速度明显快于NC-T24/GEM细胞（R 2=0.75， P<0.05，b=0.38），si-5637/GEM细胞（R 2=0.85， P<0.05，b=1.69）的存活率下降速度明显快于NC-5637/GEM细胞（R 2=0.93，P<0.05，b=0.34）。结论CKAP2L在吉西他滨耐药膀胱癌T24、5637细胞中高表达，促进细胞增殖与迁移并降低吉西他滨化疗敏感性。CKAP2L可能是膀胱癌吉西他滨化疗耐药的重要调控分子及潜在治疗靶点。