目的应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）进行分子分型，研究该地区耐药情况，为疾病防治提供参考依据。方法以该中心实验室在日常工作中收集的98株MRSA菌株作为研究菌株，采用微量肉汤稀释法测定其对16种常用抗菌药物的敏感性；应用实时荧光定量聚合酶链反应分析携带mecA耐药基因情况；应用MALDI-TOF MS对菌株进行分子分型。结果MRSA对苯唑西林、青霉素、头孢西丁均是100.00%耐药，对红霉素、红霉素/克林霉素耐药率分别为72.45%、76.53%。该地区98株MRSA菌株中对≥5种抗菌药物耐药的有71株，占72.45%。98株MRSA菌株均携带有mecA耐药基因，对万古霉素、达托霉素、利奈唑胺、呋喃妥因4种抗菌药物均没有出现耐药。应用MALDI-TOF MS进行分子分型发现有流行簇的存在。MALDI-TOF MS自建库和系统库分别对实验菌株进行鉴定，自建库和系统库鉴定结果一致，二者鉴定分值比较，差异无统计学意义（P=0.976）。结论该地区MRSA对苯唑西林、青霉素、头孢西丁、红霉素、红霉素/克林霉素耐药性较高，对万古霉素、达托霉素、利奈唑胺、呋喃妥因4种抗菌药物均没有出现耐药，均携带mecA耐药基因。构建该地区MRSA自建库对提高MALDI-TOF MS鉴别能力作用不大。