目的探讨阴道镜联合血清5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）与人表皮生长因子受体2（HER-2/neu）检测对宫颈上皮内瘤变的诊断价值。方法选取2021年8月至2024年8月在该院接受组织病理学检查和阴道镜检查93例疑似宫颈上皮内瘤变患者为研究对象。依据组织病理学检查结果，将宫颈上皮细胞阳性患者归为疾病组（n=29），阴性患者归为对照组（n=64）。采用酶联免疫吸附试验检测血清5-hmC与HER-2/neu水平。绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析血清5-hmC、HER-2/neu对宫颈上皮内瘤变的诊断效能。采用四格表法评估阴道镜联合血清5-hmC、HER-2/neu诊断宫颈上皮内瘤变的灵敏度、特异度与准确度。结果与对照组相比，疾病组血清5-hmC水平显著降低，而血清HER-2/neu水平显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.05）。阴道镜诊断宫颈上皮内瘤变的灵敏度为79.31%（23/29），特异度为82.81%（53/64），准确度为81.72%（76/93）；阴道镜联合血清5-hmC、HER-2/neu诊断宫颈上皮内瘤变的准确度为89.25%，灵敏度为75.86%，特异度为95.31%。3项联合诊断的准确度和特异度明显高于各指标单独诊断及血清5-hmC、HER-2/neu联合诊断（均P＜0.05）。结论宫颈上皮内瘤变患者的血清5-hmC水平降低，血清HER-2/neu水平升高。阴道镜联合血清5-hmC、HER-2/neu检测可显著提高对宫颈上皮内瘤变诊断效能，为临床早期识别与风险评估提供可靠依据。