目的探讨急性胆囊炎患者胆囊切除术后血清钙结合蛋白S100A12、肝素结合蛋白（HBP）、人β-防御素2（HBD2）水平及其对切口感染的诊断价值。方法选取2021年6月至2025年5月在康复大学青岛中心医院接受腹腔镜胆囊切除术且切口感染的64例急性胆囊炎患者（病例组）和切口未感染的54例急性胆囊炎患者（对照组）作为研究对象。采用微生物鉴定仪进行菌种鉴定。采用酶联免疫吸附试验检测血清S100A12、HBP、HBD2、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、降钙素原（PCT）水平。采用免疫比浊法检测C反应蛋白（CRP）水平。采用多因素Logistic回归分析急性胆囊炎患者胆囊切除术后切口感染的影响因素。绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析血清S100A12、HBP、HBD2单独及三者联合诊断急性胆囊炎患者胆囊切除术后切口感染的价值。结果64例感染患者切口分泌物中共检出82株病原体，其中革兰阴性菌38株（46.34%）、革兰阳性菌41株（50.00%）、真菌3株（3.66%）。病例组血清S100A12、HBP、HBD2、CRP、PCT水平均明显高于对照组（P＜0.05）。Pearson相关分析结果显示，病例组血清S100A12、HBP、HBD2水平与CRP、PCT水平均呈正相关（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示，血清S100A12、HBP、HBD2水平升高是急性胆囊炎患者胆囊切除术后切口感染的独立危险因素（P＜0.05）。ROC曲线分析结果显示，血清S100A12、HBP、HBD2单独及三者联合诊断急性胆囊炎患者胆囊切除术后切口感染的曲线下面积（AUC）分别为0.846、0.800、0.816、0.966，三者联合诊断的AUC明显大于血清S100A12、HBP、HBD2单独诊断的AUC（Z=3.151、3.722、3.672，均P＜0.05）。结论血清S100A12、HBP、HBD2联合检测有利于提高早期诊断急性胆囊炎患者胆囊切除术后切口感染的效能，值得临床推广。